河北來復(fù)醫(yī)藥科技有限公司
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普瑞巴林是一種新型鈣離子通道調(diào)節(jié)劑，能阻斷電壓依賴性鈣通道，減少神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。該藥是一種新型γ-氨基丁酸(GABA)受體激動(dòng)劑，能阻斷電壓依賴性鈣通道，減少神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，臨床主要用于治療外周神經(jīng)痛以及輔助性治療局限性部分癲癇發(fā)作。
普瑞巴林一般為口服用藥，其生物利用率可達(dá)到或高于90%。在血漿中的血藥濃度約0.04到9.5 μg/mL
材料與方法
普瑞巴林（pregabalin)，分子式C8H17NO2 ，分子量159.23，CAS : 148553-50-8，pKa 4.2和10.6。其結(jié)構(gòu)式見圖1。
普瑞巴林化學(xué)結(jié)構(gòu)式
本實(shí)驗(yàn)使用96孔蛋白沉淀板對(duì)血漿樣品進(jìn)行凈化：Cleanert 蛋白沉淀板(Cat: 96CD2025-Q, Spec: 2mL/well, Lot: 150623)，96位正壓裝置，96孔接收板，Venusil MP C18(2) ( 2.1x50mm，5μm，110? )，以上產(chǎn)品均為天津博納艾杰爾科技有限公司產(chǎn)品；
LC/MS/MS, API 4000+液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（SCIEX）。
血漿為牛血漿。
HPLC條件
色譜柱：Venusil MP C18（2）( 2.1x50mm，5μm，110 ?);
流速：200 μL/min；
柱溫：30℃；
進(jìn)樣量：5 μL；
流動(dòng)相：A-0.1%甲酸水溶液；B-甲醇。
表1. HPLC梯度條件
|
Step |
Total Time(min) |
Flow Rate(μl/min) |
A (%) |
B (%) |
|
0 |
0 |
200 |
80 |
20 |
|
1 |
4 |
200 |
80 |
20 |
質(zhì)譜條件
掃描模式：電噴霧電離正模式；
采集模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；
電噴霧電壓：4500V；
氣簾氣（curtain gas）：30；
霧化氣（gas 1）：60；
輔助氣（gas 2）：30；
離子源溫度（TEM）：450℃
表2 串聯(lián)質(zhì)譜參數(shù)
|
化合物 |
保留時(shí)間 |
Q1 |
Q3 |
DP |
CE |
|
普瑞巴林 |
1.98 min |
160.2 |
142.1(定量) |
50 |
15 |
|
125 |
50 |
19 |
|||
|
97 |
50 |
21 |
樣品處理方法
蛋白沉淀
將50 μL血漿和50 μL甲醇/水（1/1）提前混合。然后向96孔板中加入500 μL甲醇，再將上面混好的血漿加到孔中，用移液器反復(fù)抽吸幾次或使用漩渦混合器混合；
使用SPE-M96正壓裝置，調(diào)節(jié)壓力，將液體收集到96孔收集板中，3分鐘后停止正壓裝置；
向收集板中各孔中加入400 μL 0.1%甲酸水，混勻，準(zhǔn)備檢測(cè)。
結(jié)果與討論
表3. 血漿中普瑞巴林的回收率情況
|
加標(biāo)濃度 (ng/mL) |
平均回收率 (n=8) |
RSD (n=8) |
LOD (ng/mL) |
|
25 |
96.8% |
3.12% |
0.3 |
|
100 |
95.9% |
5.05% |
結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)使用蛋白沉淀板對(duì)血漿中的普瑞巴林進(jìn)行了快速提取檢測(cè)。在25-100 ng/mL濃度下，平均回收率為96.8%和95.9%，RSD值小于5.05%，可以滿足相關(guān)的檢測(cè)需求。
訂貨信息
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格/包裝 |
訂貨號(hào) |
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Cleanert 蛋白沉淀板 |
96孔板，2mL/well |
96CD2025-Q |
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Cleanert M96 生物樣品前處理儀 |
與96孔板匹配 |
SPE-M96 |
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96位接收板 |
2mL/well，與96孔板匹配 |
96SP2036-2 |
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Venusil MP C18(2) |
2.1*50mm,5μm,110 ? |
VA950502-2 |
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甲醇 |
LC-MS級(jí), 4*2.5L |
LC230 |
|
水 |
LC-MS級(jí),4*2.5L/箱 |
LC365 |
應(yīng)用編號(hào)：YB10008
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