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美托洛爾、氧烯洛爾和普萘洛爾屬于β受體阻斷藥（英：Beta blockers）（又稱β受體阻斷劑），其是一類用來治療心律不齊、防止心臟病發(fā)作后的二次心臟病發(fā)作（二級(jí)預(yù)防）和在某些情況下用來治療高血壓的藥物。β受體阻斷藥非競(jìng)爭(zhēng)性阻斷交感神經(jīng)系統(tǒng)中內(nèi)源性兒茶酚胺腎上腺素和去甲腎上腺素的作用，尤其是腎上腺素能β受體。有些藥物阻斷所有β-腎上腺素能受體，有些則為競(jìng)爭(zhēng)性阻斷。

材料與方法

美托洛爾（Metoprolol)，分子式C15H25NO3 ，分子量267.36，CAS : 37350-58-6，pKa 9.5，Kow 1.8。其結(jié)構(gòu)式見圖1。

氧烯洛爾(Oxprenolol)，分子式C15H23NO3 ，分子量265.35，CAS : 6452-71-7，pKa 9.5，Kow 2.2。其結(jié)構(gòu)式見圖2。

普萘洛爾(Propranolol)，分子式C16H21NO2 ，分子量259.34，CAS : 525-66-6，pKa 9.5，Kow 3.48。其結(jié)構(gòu)式見圖3。   

本實(shí)驗(yàn)使用Cleanert® Micro Plate可拆卸微孔PEP板對(duì)血漿樣品中的美托洛爾、氧烯洛爾和普萘洛爾進(jìn)行檢測(cè)。Cleanert® Micro Plate可拆卸微孔PEP板(Cat: PE00501-MW, Spec: 5 mg, 1mL/well, 2 plates)，Cleanert® M96 生物樣品前處理儀，1mL 96孔接收板，Venusil MP C18 ( 2.1x150mm，5μm，100? )，以上產(chǎn)品均為天津博納艾杰爾科技有限公司產(chǎn)品；

LC/MS/MS, API 4000+液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（AB SCIEX）。

HPLC條件

色譜柱：Venusil MP C18 ( 2.1x150mm, 5μm, 100 ?);

流速：300 μL/min；

柱溫：30℃；

進(jìn)樣量：10 μL；

流動(dòng)相：A-0.1%甲酸水溶液；B-0.1%甲酸乙腈溶液。

表1 HPLC梯度條件

質(zhì)譜條件

掃描模式：電噴霧電離正模式；

采集模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；

電噴霧電壓：5000V；

氣簾氣（curtain gas）：15；

霧化氣（gas 1）：50；

輔助氣（gas 2）：40；

離子源溫度（TEM）：500℃

表2 串聯(lián)質(zhì)譜參數(shù)

注：*為定量離子

標(biāo)準(zhǔn)品制備

  將美托洛爾、氧烯洛爾、普萘洛爾標(biāo)準(zhǔn)品各10 mg與10 mL甲醇混合，配置含美托洛爾、氧烯洛爾、普萘洛爾1 mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)品。

  將1 mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液每次用水稀釋10倍，最終配置100 ppb和10ppb的混合標(biāo)準(zhǔn)品。

樣品處理方法

樣品準(zhǔn)備：

 ①高濃度(50 ppb)：將100 ppb混合標(biāo)準(zhǔn)品與血漿等體積混合，配置50 ppb血漿加標(biāo)樣品。

 ②低濃度(5 ppb): 將10 ppb混合標(biāo)準(zhǔn)品與血漿等體積混合，配置5 ppb血漿加標(biāo)樣品。

 ③不加標(biāo)：將水與血漿等體積混合，配置不加標(biāo)的血漿樣品。

固相萃取實(shí)驗(yàn)過程

活化：加入200 μL甲醇； 加入200 μL水；

上樣：200 μL樣品；

淋洗：200 μL 5%甲醇水溶液；

洗脫：50 μL含2%甲酸的乙腈和異丙醇混合溶液=4:6；用150 μL的水定容洗脫液到200 μL，混勻，待測(cè)。

 結(jié)果

表3. 血漿中美托洛爾、氧烯洛爾、普萘洛爾的回收率，n=8

結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)使用Cleanert® Micro Plate PEP可拆卸微孔板提取血漿中美托洛爾、氧烯洛爾和普萘洛爾，使用微量體積洗脫，洗脫液不需要氮吹濃縮復(fù)溶即可達(dá)到相同的檢出限?；厥章屎蚏SD值良好，可用于相關(guān)的檢測(cè)。

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