河北來復(fù)醫(yī)藥科技有限公司
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不飽和脂肪酸是構(gòu)成體內(nèi)脂肪的一種脂肪酸，人體必需的脂肪酸。花生四烯酸(ＡＡ)是一種在生物體內(nèi)含量較高, 分布最廣的多不飽和必需脂肪酸。對糞便樣品中花生四烯酸的研究，可為體內(nèi)脂肪酸代謝提供一定參考信息。
本實(shí)驗(yàn)采用Cleanert MAS-M對糞便樣品進(jìn)行凈化處理，建立了糞便樣品中花生四烯酸含量檢測方法。
目標(biāo)物信息
材料與儀器
Cleanert MAS-M 96孔萃取板；Cleanert M96 生物樣品前處理儀；Cleanert V96 氮吹濃縮儀；96孔接收板；PTFE過濾頭；Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm，150?）；API 4000+ LC-MS/MS串聯(lián)質(zhì)譜。
樣品處理方法
樣品前處理
稱取50mg糞便樣品加入5mL離心管中，向其中加入0.5mL 1%甲酸水，渦旋混勻2min，再向其中加入1.5mL甲醇，渦旋，6000r/min離心5min，取上清液；重復(fù)上述步驟再提取一次，合并上清液，過0.22μm PTFE濾頭，向其中加入0.6mL氨水，使上樣液中含有4%氨水，待凈化。
凈化過程
所用SPE為Cleanert MAS-M 96孔萃取板
活化：甲醇600μL，水600μL
上樣：待凈化液全部上樣，上樣液棄去
淋洗：水600μL，甲醇600μL，棄去
洗脫：3%甲酸乙腈溶液600μL，使用96孔收集板將洗脫液分別收集。
將收集板放置于96位氮吹儀上，將溫度設(shè)定為45℃，開啟氮?dú)鈱⑾疵撘旱抵两?，并?00μL乙腈/水（7/3，v/v）將樣品重溶，進(jìn)樣檢測。
儀器檢測條件
HPLC條件
色譜柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm，150?）
流速：200μL/min
柱溫：30℃
進(jìn)樣量：5μL
流動相：乙腈/水（75/25，v/v）
質(zhì)譜條件
掃描模式：電噴霧電離負(fù)模式
采集模式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）
表1 質(zhì)譜參數(shù)
|
化合物 |
Q1 |
Q3 |
DP |
CE |
|
花生四烯酸 |
303.0 |
259.1 |
-109 |
-18 |
|
303.0 |
230.9 |
-85 |
-29 |
|
|
303.0 |
205.1 |
-107 |
-20 |
|
|
303.0 |
177.1 |
-90 |
-30 |
圖1 花生四烯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（濃度為5ppm）
圖2 糞便樣品色譜圖
圖3 糞便樣品加標(biāo)色譜圖（加標(biāo)濃度為10mg/kg）
實(shí)驗(yàn)所用的糞便樣品中含有約3mg/kg的花生四烯酸，計(jì)算加標(biāo)回收率時(shí)需要扣除樣品中目標(biāo)物的含量。
表2 回收率數(shù)據(jù)
|
加標(biāo)濃度 |
平均加標(biāo)回收率 |
LOD |
|
10mg/kg |
88.9% |
1μg/kg |
結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)采用Cleanert MAS-M 96孔板對糞便樣品中的花生四烯酸進(jìn)行批量樣品高通量前處理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Cleanert MAS-M能夠有效除去干擾物，并能夠?qū)ㄉ南┧徇M(jìn)行定量萃取，回收率達(dá)到88.9%，可以滿足日常對批量生物樣品分析的需求。
訂貨信息表
|
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格/包裝 |
訂貨號 |
|
Cleanert MAS-M |
96孔板，50mg/2mL |
MS-M-0502W |
|
PTFE濾頭 |
0.22μm，200/pk |
AS041320 |
|
Cleanert V96 氮吹濃縮儀 |
與96孔板匹配 |
NV96-G |
|
Cleanert M96 生物樣品前處理儀 |
與96孔板匹配 |
SPE-M96 |
|
96孔接收板 |
2mL/well，與96孔板匹配 |
96SP2036-Y |
|
Venusil ASB C18 |
2.1*50mm，3μm，150? |
VS930502-0 |
|
乙腈 |
LC-MS級, 4*2.5L/箱 |
LC015 |
|
水 |
LC-MS級，4*2.5L/箱 |
LC365 |
|
甲醇 |
HPLC, 4*4L |
AH230-4 |
|
1.5mL棕色進(jìn)樣樣品瓶 |
100/pk |
1109-0520 |
|
進(jìn)樣樣品瓶瓶蓋 |
100/pk |
0915-1819 |
|
樣品瓶內(nèi)插管 |
100/pk |
0609-0357 |
應(yīng)用編號：YB10002
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