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激素檢測(cè)/application當(dāng)前位置: 首頁(yè) ? 行業(yè)應(yīng)用 ? 臨床檢測(cè)研究 ? 激素檢測(cè) ? 正文
LC/MS/MS檢測(cè)血清中類固醇激素-Cleanert PEP
發(fā)布日期:2019-03-29

類固醇激素又稱為甾體激素,是內(nèi)分泌細(xì)胞分泌的高效能生物化學(xué)物質(zhì)。它們?cè)诰S持生命、調(diào)節(jié)機(jī)體物質(zhì)代謝、促進(jìn)性器官發(fā)育和維持生育等方面起著重要作用。

類固醇激素在體內(nèi)的含量較低,對(duì)其準(zhǔn)確定量具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)采用Cleanert® PEP 96微孔板對(duì)血清樣品進(jìn)行凈化,建立了血清中類固醇激素的檢測(cè)方法,該方法適合高通量樣品前處理。

目標(biāo)物信息

表1 化合物結(jié)構(gòu)

化合物

英文名

CAS

分子量

結(jié)構(gòu)

氫化可的松

Hydrocortisone

50-23-7

362.46

LC/MS/MS檢測(cè)血清中類固醇激素-Cleanert PEP

睪酮

Testosterone

58-22-0

 288.42

LC/MS/MS檢測(cè)血清中類固醇激素-Cleanert PEP

黃體酮

Progesterone

57-83-0

386.5244

醛固酮

Aldosterone

52-39-1

360.44

脫氫表雄酮

Dehydroepiandrosterone

53-43-0

288.4

材料及儀器

Cleanert PEP 96微孔板(5mg/1mL);96孔板正壓裝置;96位接收板;Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150 ?);API 4000+。

 樣品處理方法

 樣品預(yù)處理

100μL血清樣品與100μL 含有1%甲酸的甲醇/水溶液混合(50/50,v/v)

SPE過(guò)程

活化:依次用200μL甲醇、200μL水活化;

上樣:將預(yù)處理過(guò)的血清樣品上樣至96孔板中;

淋洗:加入400μL甲醇/水(35/65, v/v)用于淋洗樣品中的干擾物;

洗脫:加入200μL 1%甲酸甲醇,用96位收集板收集洗脫液用于LC-MS/MS檢測(cè)。(將洗脫液氮吹濃縮可獲得更低的檢測(cè)限)

儀器檢測(cè)條件

HPLC條件

色譜柱:Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150?)

流速:200μL/min

柱溫:30℃

進(jìn)樣量:3μL

流動(dòng)相:0.1%甲酸水/0.1%甲酸乙腈( 40/ 60,v/v)

質(zhì)譜條件

掃描模式:電噴霧電離正模式

采集模式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)

表2 參數(shù)信息

ID

tR/min

Q1

Q3

DP

CE

氫化可的松

0.98

363.2

120.9

74

40

363.2

327.2

70

23

睪酮

1.66

289.4

97.1

100

31

289.4

109.1

90

40

醛固酮

0.98

361.3

325.3

84

30

361.3

315.4

77

29

脫氫表雄酮

1.66

289.4

253.4

70

24

289.4

213.1

71

23

黃體酮

3.15

315.4

97.1

95

35

315.4

109.1

95

39

結(jié)果

圖1 30ppb類固醇激素標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

圖2 血清樣品色譜圖

圖3 血清加標(biāo)樣色譜圖(濃度為30ppb)

表3 加標(biāo)回收率數(shù)據(jù)

加標(biāo)濃度

醛固酮

氫化可的松

睪酮

脫氫表雄酮

黃體酮

30ppb

85.9%

87.0%

105.5%

110.6%

97.7%

結(jié)論

在臨床檢驗(yàn)中類固醇激素是一個(gè)難點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)使用Cleanert® PEP 96孔板提取血清中的類固醇,加快了檢測(cè)速度,相較免疫法提高了最低檢測(cè)濃度,回收率高于85%,可滿足實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)相關(guān)物質(zhì)的需要。

訂貨信息表

產(chǎn)品名稱

規(guī)格/包裝

訂貨號(hào)

Cleanert PEP

96微孔板,5mg/1mL

PE00501-MW

Cleanert M96 生物樣品前處理儀

96孔板匹配

SPE-M96

Cleanert V96 氮吹濃縮儀

96孔板匹配

NV-96G

96位接收板

1mL,與96孔板匹配

96SP1036-Y

Venusil ASB C18

2.1*50mm,3μm,150   ?

VS930502-0

甲醇

HPLC,4*4L

AH230-4

乙腈

HPLC,4*4L

AH015-4

LC-MS級(jí),4*2.5L/

LC365

應(yīng)用編號(hào):YB10007

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