河北來復(fù)醫(yī)藥科技有限公司
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前言
食品抗氧化劑是能阻止或延緩食品氧化變質(zhì)、提高食品穩(wěn)定性和延長貯存期的食品添加劑。氧化反應(yīng)不僅會使食品中的油脂變質(zhì)，而且還會使食品褪色、變色和破壞維生素等，從而降低食品的感官質(zhì)量和營養(yǎng)價值，甚至產(chǎn)生有害物質(zhì)，引起食物中毒。
由于合成抗氧化劑化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，價格比較優(yōu)惠且有較好的效果，在預(yù)防脂質(zhì)氧化的方法中，往往被優(yōu)先考慮，一般使用的合成抗氧化劑有BHA、BHT、TBHQ等。
然而由于這些抗氧化劑不是食品成分之一，而且在食品工業(yè)中存在很多違規(guī)操作，抗氧化劑的添加往往超出規(guī)定的標(biāo)準，越來越多的研究表明：人工合成的抗氧化劑有一定的毒副作用，有害人們的身心健康，因此對食品中合成抗氧化劑的測定顯得尤為重要。
本實驗建立了高效液相色譜法檢測花生油中8種抗氧化劑的方法。
實驗部分
儀器、試劑與材料
主要儀器設(shè)備
高效液相色譜儀（紫外檢測器）；博納艾杰爾12位負壓SPE裝置。
試劑材料
乙腈、甲醇為色譜純；實驗用水為超純水，8種抗氧化劑標(biāo)準品及化學(xué)式，CAS號見表1；
表1.食品中8種抗氧化劑中文與英文名稱、CAS號
|
序號 |
中文名稱 |
英文名稱 |
英文簡稱 |
CAS號 |
|
|
1 |
沒食子酸丙酯 |
Propyl gallate |
PG |
121-79-9 |
|
|
2 |
叔丁基對苯二酚 |
Tert-butylhydroquinone |
TBHQ |
1948-33-0 |
|
|
3 |
去甲二氫愈創(chuàng)木酸 |
Nordihydroguaiaretic acid |
NDGA |
500-38-9 |
|
|
4 |
叔丁基對羥基茴香醚 |
Butylhydroxyanisole |
BHA |
25013-16-5 |
|
|
5 |
2,6-二叔丁基-4-羥甲基苯酚 |
2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol |
Ionox-100 |
489-01-0 |
|
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6 |
沒食子酸辛酯 |
Octyl gallate |
OG |
1034-01-1 |
|
|
7 |
2,6-二叔丁基對甲基苯酚 |
Butylated hydroxytoluene |
BHT |
128-37-0 |
|
|
8 |
沒食子酸十二酯 |
Dodecyl gallate |
DG |
1166-52-5 |
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一次性無菌注射器；Nylon針式過濾器 (0.22 μm，直徑13 mm) ；
Cleanert S C18-N固相萃取柱：2000 mg/12 mL
樣品制備
樣品提取
稱1 g樣品至50 mL離心管中，加10 mL乙腈，震蕩2 min，超聲10 min，3000 r/min離心5 min，收集上清液至雞心瓶中，再加10 mL乙腈萃取，震蕩2 min，超聲1 min，3000 r/min離心5 min合并上清液。
樣品凈化
先將小柱用5 mL甲醇，5 mL乙腈活化平衡，然后將待凈化液上SPE柱，收集流出液，再用10 mL乙腈︰甲醇=2︰1（V/V）進行洗脫，并收集洗脫液，40℃蒸干，用1 mL乙腈溶解殘留物，過0.22 μm Nylon針式過濾器后待測。
以上凈化步驟可用卓睿全自動固相萃取儀完成。
實驗條件
液相條件
色譜柱：Venusil® XBP C18（L），5 μm，150 ?，4.6 × 250 mm
流動相：A: 0.5%甲酸水溶液；B:甲醇；
流 速：1 mL/min
柱 溫：35℃
進樣量：5 μL
檢測波長：280 nm
流動相梯度見表2
表2.流動相梯度
|
時間/min |
A/% |
B/% |
|
0 |
40 |
60 |
|
15 |
30 |
70 |
|
25 |
0 |
100 |
|
30 |
0 |
100 |
|
31 |
40 |
60 |
|
35 |
40 |
60 |
結(jié)果與討論
實驗結(jié)果
由表3可知，采用固相萃取結(jié)合液相色譜法檢測食品中8種抗氧化劑，花生油基質(zhì)加標(biāo)回收率89% ~ 106%，變異系數(shù)小于6.0%，能夠滿足檢測標(biāo)準要求。
表3. 花生油中8種抗氧化劑加標(biāo)回收實驗結(jié)果
|
物質(zhì)名稱 |
保留時間/min |
添加水平/mg/kg |
回收率 /% |
CV /% |
|
PG |
4.430 |
171 |
93.8 |
4.3 |
|
TBHQ |
6.058 |
135 |
100.6 |
2.5 |
|
NDGA |
11.447 |
121 |
95.5 |
5.8 |
|
BHA |
13.078 |
213 |
105.0 |
3.0 |
|
Ionox-100 |
17.806 |
141 |
105.2 |
2.8 |
|
OG |
20.920 |
95 |
93.5 |
4.2 |
|
BHT |
26.506 |
151 |
101.3 |
2.7 |
|
DG |
26.804 |
135 |
89.5 |
4.3 |
圖1. 8種抗氧化劑標(biāo)準溶液液相色譜圖（標(biāo)準濃度：PG: 171 μg/mL、TBHQ: 135 μg/mL、NDGA: 121 μg/mL、BHA: 213 μg/mL、Ionox-100: 141 μg/mL、OG: 95 μg/mL、BHT: 151 μg/mL、DG: 135 μg/mL）
圖2. 花生油基質(zhì)空白液相色譜圖
圖3. 花生油基質(zhì)加標(biāo)液相色譜圖（加標(biāo)濃度：PG: 171 mg/kg、TBHQ: 135 mg/kg、NDGA: 121 mg/kg、BHA: 213 mg/kg、Ionox-100: 141 mg/kg、OG: 95 mg/kg、BHT: 151 mg/kg、DG: 135 mg/kg）
圖4. 乙腈提取后氮氣吹干油樣殘留（左：1 g油樣；右：凈化后油樣殘留）
結(jié)論
本實驗建立了花生油中8種抗氧化劑的檢測方法，并結(jié)合高效液相色譜對花生油中8種抗氧化劑含量進行測定。對加標(biāo)量為PG: 171 mg/kg、TBHQ: 135 mg/kg、NDGA: 121 mg/kg、BHA: 213 mg/kg、Ionox-100: 141 mg/kg、OG: 95 mg/kg、BHT: 151 mg/kg、DG: 135 mg/kg 的花生油樣品，回收率在89% ~ 106%之間，變異系數(shù)小于6.0%，符合實驗要求。
附：相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格描述 |
包裝數(shù)量 |
訂貨號 |
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Venusil® XBP C18(L) |
5 μm，150 ?，4.6 × 250 mm |
1支 |
VX952505-L |
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Cleanert S C18-N |
2000 mg/12 mL |
20支/包 |
S18200012N |
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Qdaura®卓睿全自動固相萃取系統(tǒng) |
4通道 |
1臺 |
SPE-40 |
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15位氮吹儀 |
15位 |
1臺 |
NV15-M |
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保護柱套 |
適用于4.6 × 10 mm和2.1 × 10 mm |
1支 |
SH-100 |
|
直聯(lián)式保護柱芯 |
5 μm，150 ?；4.6 × 10 mm |
4支/包 |
VX950105-LS |
|
1.5 mL樣品瓶 |
短螺紋透明帶書寫處32 × 11.6 mm |
100/pk |
1109-0519 |
|
1.5 mL樣品瓶蓋 |
9 mm中心孔藍蓋，紅色橡膠/米色PTFE隔墊45°Shore A; 1.0 mm |
100/pk |
0915-1819 |
|
Nylon針式過濾器 |
單膜，13 mm，0.22 μm |
200/pk |
AS021320 |
|
一次性注射器 |
2 mL無針頭 |
100支/包 |
LZSQ-2ML |
應(yīng)用編號：AF10133
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