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前言

維生素B2又叫核黃素，為體內(nèi)黃酶類輔基的組成部分（黃酶在生物氧化還原中發(fā)揮遞氫作用），當(dāng)缺乏時(shí)，就影響機(jī)體的生物氧化，使代謝發(fā)生障礙。其病變多表現(xiàn)為口、眼和外生殖器部位的炎癥，如口角炎、唇炎、舌炎、眼結(jié)膜炎和陰囊炎等，故本品可用于上述疾病的防治。體內(nèi)維生素B2的儲(chǔ)存是很有限的，因此每天都要由飲食提供。維生素B2是水溶性維生素，容易消化和吸收，被排出的量隨體內(nèi)的需要以及可能隨蛋白質(zhì)的流失程度而有所增減；它不會(huì)蓄積在體內(nèi)，所以時(shí)常要以食物或營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)品來(lái)補(bǔ)充。廣泛存在于酵母、肝、腎、蛋、奶、大豆等中。

實(shí)驗(yàn)部分

儀器、試劑與材料

主要儀器設(shè)備

高效液相色譜儀-熒光檢測(cè)器

試劑材料

冰乙酸、甲醇、鹽酸均為色譜純；

氫氧化鈉、三水合乙酸鈉為分析純；

維生素B2標(biāo)準(zhǔn)品（純度98%）；

木瓜蛋白酶：酶活力≥10 U/mg；

高峰淀粉酶：酶活力≥100 U/mg；

1 mol/L氫氧化鈉溶液：稱取4 g氫氧化鈉，加90 mL水溶解，冷卻后定容至100 mL；

0.1 mol/L鹽酸溶液：移取8.5 mL鹽酸，加水稀釋至1000 mL，搖勻；

0.05 mol/L乙酸鈉溶液：稱取6.08 g乙酸鈉，加900 mL水溶解，用冰乙酸調(diào)節(jié)pH為4.0 ~ 5.0之間，加水定容至1000 mL；

0.1 mol/L乙酸鈉溶液：稱取13.60 g乙酸鈉，用水溶解并定容至1000 mL；

混合酶溶液：稱取2.345 g木瓜蛋白酶、1.175 g高峰淀粉酶，加水溶解后定容至50 mL。

樣品制備

稱取2 ~ 10 g混勻后的試樣（試樣中的維生素B2的含量大于5 μg）于100 mL具塞錐形瓶中，加入60 mL的0.1 mol/L鹽酸溶液，充分搖勻，塞好瓶塞。將錐形瓶放入高壓滅菌鍋內(nèi)，在121℃下保持30 min，冷卻至室溫后取出。用1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6.0 ~ 6.5，加入2 mL混合酶溶液，搖勻后置于37℃培養(yǎng)箱或者恒溫水浴鍋中過(guò)夜酶解。將酶解液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，用濾紙過(guò)濾或離心，取濾液或上清液，過(guò)0.45 μm水相濾膜作為待測(cè)液。

實(shí)驗(yàn)條件

液相條件

色譜柱：Venusil®XBP C18(2)  5 μm，4.6 × 150mm，100 ?

流動(dòng)相：0.05 mol/L乙酸鈉溶液︰甲醇 = 65︰35

熒光檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)462 nm，發(fā)射波長(zhǎng)522 nm

流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。

結(jié)果與討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)圖1、圖2可知，采用Venusil XBP C18(2)色譜柱檢測(cè)嬰幼兒配方奶粉中的維生素B2，峰形良好，保留時(shí)間穩(wěn)定，能夠滿足實(shí)驗(yàn)要求。

圖1 維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液

圖2 嬰幼兒配方奶粉中的維生素B2

結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)依據(jù)GB 5009.85-2016第一法，用Venusil XBP C18(2)（5 μm，100 ?，4.6 × 150 mm）檢測(cè)嬰幼兒配方奶粉中的維生素B2，并結(jié)合液相色譜-熒光檢測(cè)器對(duì)樣品進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果維生素B2保留時(shí)間穩(wěn)定，峰形良好，而且試樣中雜質(zhì)與維生素B2分離度良好，說(shuō)明Venusil XBP C18(2)（5 μm，100 ?，4.6 × 150 mm）色譜柱能夠用于嬰幼兒配方奶粉中維生素B2的檢測(cè)。

注意事項(xiàng)

可以在避光的條件下，用直接酸解法除去樣品中的蛋白質(zhì)。這種方法操作比較簡(jiǎn)單，耗時(shí)短，成本也比較低。

附：相關(guān)產(chǎn)品

應(yīng)用編號(hào)：AF10011