河北來復(fù)醫(yī)藥科技有限公司
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硝基咪唑類 (Nitroimidazoles) 藥物是帶有硝基的咪唑化合物，其性狀為白色或淡黃色結(jié)晶，弱堿性，能和酸結(jié)合成鹽，遇光易分解，易溶于甲醇，微溶于水，主要用于預(yù)防和治療家禽的滴蟲病、豬的出血性下痢及厭氧菌感染，并具有促生長(zhǎng)作用，但是該類藥物對(duì)哺乳動(dòng)物具有致
癌、致畸、致突變作用和遺傳毒性。因此歐盟、北美和我國(guó)等都禁止了硝基咪唑在食品動(dòng)物中的使用。農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-2-2008規(guī)定了在畜禽肉中硝基咪唑類藥物殘留方法檢出限為1μg/kg。
(1) 樣品提取
稱取2.00g(精確到0.01g)均質(zhì)好的樣品，置于50.0mL離心管中，加入15.0mL 乙酸乙酯，渦旋振蕩2min，4000rpm離心5min，上清液轉(zhuǎn)移至80mL頂空瓶中，殘?jiān)?5.0mL乙酸乙酯重復(fù)提取一次，合并兩次提取液，加入4g氯化鈉和20.0mL正己烷，振蕩器上振蕩10min，4200rpm離心10min，小心吸取下層乙酸乙酯層于另一離心管中，氮?dú)獯抵两桑?用6mL 0.1mol/L鹽酸溶液溶解殘?jiān)鼈溆谩?
(2) 凈化方法
先將Cleanert PCX (60mg/3mL)小柱分別用2.0mL甲醇、2.0mL 0.1mol/L鹽酸水溶液活化平衡，然后樣品殘液過柱(流速控制在2~3 mL/min)，棄去濾液；再用1.0mL 0.1mol/L鹽酸水溶液、1.0mL甲醇和1.0mL甲醇-水(1:9，v/v)淋洗SPE柱，棄去淋洗液，最后用3.0mL甲醇-5%氨水(3:2，v/v)洗脫于錐形試管中，40℃氮?dú)獯蹈伞Ｓ? mL甲醇-水溶液(1:9，v/v)溶解殘留物，過0.22μm尼龍針式過濾器后待測(cè)。
(3) 檢測(cè)方法
3.1 色譜條件
色譜柱：Venusil ASB C18，2.1×100mm，5μm，150?；
流動(dòng)相：A相-水，B相-乙腈
柱 溫：35℃；
進(jìn)樣量：5μL；
表1 液相色譜梯度洗脫條件：
|
時(shí)間(min) |
流速 (mL/min) |
A/% |
B/% |
|
0 |
0.35 |
100 |
0 |
|
1.5 |
0.35 |
100 |
0 |
|
3.5 |
0.35 |
60 |
40 |
|
4 |
0.35 |
60 |
40 |
|
4.01 |
0.35 |
5 |
95 |
|
5 |
0.35 |
5 |
95 |
|
5.01 |
0.35 |
100 |
0 |
|
7 |
0.35 |
100 |
0 |
3.2 質(zhì)譜條件
離子源：電噴霧離子源 掃描方式：正離子掃描
電噴霧電壓：5500 V 霧化氣壓力：55 psi
氣簾氣壓力：13 psi 輔助氣壓力：60 psi
離子源溫度：600℃ 采集方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)
Q1、Q3均為單位分辨率
質(zhì)譜參數(shù)(見表2)
(4) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
由表3可知，采用固相萃取結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)甲硝唑和地美硝唑，加標(biāo)量為1.0μg/kg加標(biāo)回收率為90%~100%，能夠滿足檢測(cè)要求。由圖1可看出經(jīng)Cleanert PCX固相萃取柱凈化，采用Venusil ASB C18色譜柱檢測(cè)能夠使甲硝唑和地美硝唑得到良好的分離，且兩種物質(zhì)峰形良好，保留時(shí)間穩(wěn)定。
表3 硝基咪唑類藥物加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)：
圖1 硝基咪唑類樣品加標(biāo)1.0μg/kg液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜質(zhì)量色譜圖
結(jié)論：
本實(shí)驗(yàn)建立了硝基咪唑類殘留量檢測(cè)的LC-MS/MS檢測(cè)方法，并結(jié)合固相萃取技術(shù)對(duì)禽畜類肉中硝基咪唑類藥物的殘留量進(jìn)行了測(cè)定。對(duì)于加標(biāo)量為1μg/kg的樣品進(jìn)行了檢測(cè)，回收率在90%~100%，符合國(guó)標(biāo)要求，固相萃取方法穩(wěn)定并且色譜柱重現(xiàn)性良好，說明本方法能夠用于檢測(cè)動(dòng)物源性食品中的硝基咪唑殘留量。
(5) 訂貨信息：
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格包裝 |
訂貨號(hào) |
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Venusil ASB C18 |
5μm,150?,2.1×100mm |
VS951002-0 |
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Cleanert® PCX |
60mg/3mL,50/pk |
CX0603 |
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保護(hù)柱套 |
適用于4.6×10mm和2.1×10mm |
SH-100 |
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直聯(lián)式保護(hù)柱芯 |
5μm,150?,2.1×10mm |
VS950102-0S |
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1.5 mL樣品瓶 |
短螺紋透明帶書寫32×11.6mm,100/pk |
1109-0519 |
|
1.5mL樣品瓶蓋 |
9 mm中心孔藍(lán)蓋，紅色橡膠/米色PTFE隔墊,45．Shore A 1.0 mm,100/pk |
0915-1819 |
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針式過濾器(Nylon) |
13mm,0.22μm,200/pk |
AS021320 |
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一次性注射器 |
2mL兩件式 無(wú)針頭,100/pk |
LZSQ-2ML |
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乙腈UV級(jí) |
4L/瓶,色譜純 |
015-4 |
|
甲醇 |
4L/瓶,色譜純 |
S230-4 |
應(yīng)用編號(hào)：AF10027
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